PRÁCTICA 8: Recuento de hematíes

Objetivo: Realizar un recuento de hematíes a través de la utilización de la cámara de Neubauer.

Fundamento: El recuento de hematíes (RBC) consiste en la determinación del número de eritrocitos presentes en un volumen determinado de sangre (1mm3).

Para el recuento en cámara de glóbulos rojos, se diluye la sangre problema en un líquido apropiado y posteriormente se deposita en la cámara de recuento, donde se cuentan las células presentes en algunos cuadrados de uno de los reticulocitos.

Materiales: Papel de filtro, frasco lavador, cubreobjetos, micropipeta (200 y 10 microlitros), puntas micropipeta, vaso de precipitado, tubos de ensayo, gradilla, pipeta Pasteur, tubo Eppendorf.

Reactivos: reactivo de Hayem, agua destilada.

Equipos: microscopio, pipeta de Thoma y auxiliar, cámara de Neubauer.

Muestra: sangre venosa.

Procedimiento: 

Micropipeta

1. Preparar la zona de trabajo y rotular todo.
2. Llenar un tubo de ensayo con reactivo de Hayem.
3. Impregnar con agua el exterior de la cámara de Neubauer y pegar el cubreobjetos.
4. Para una dilución 1/200 se coge 1 microlitro de sangre y 199 microlitros de reactivo de Hayem, se deposita en un tubo Eppendorf y se homogeneiza.
5. Se vierte 10 microlitros en la cámara de Neubauer en ambos lados.
6. Esperar unos minutos y observar al microscopio con el objetivo de 40x para realizar el recuento de hematíes.

Pipeta de Thoma

1. Preparar la zona de trabajo y rotular todo.
2. Llenar un tubo de ensayo con reactivo de Hayem.
3. Impregnar con agua el exterior de la cámara de Neubauer y pegar el cubreobjetos.
4. Para una solución 1/200 se llena la pipeta de Thoma hasta 0,5 con sangre y el resto con reactivo de Hayem hasta llegar a 101.
5. Quitar auxiliar de pipeteo y tapar orificios de la pipeta de Thoma con los dedos, homogeneizar.
6. Desechar las 3 primeras gotas y verter en cada pocillo de la cámara 1 gota.
7. Dejar reposar unos minutos y observar al microscopio con el objetivo de 40x para hacer el recuento de hematíes.

Recuento

Se cuentan los hematíes presentes en 5 cuadrados medianos del cuadrado grande central, éste tiene 25 cuadrados medianos, hay que multiplicar por 5 la cifra obtenida en el recuento, para calcular el número de hematíes que hay en el cuadrado grande.

La longitud de cada uno de los lados del cuadrado grande central es de 1 mm, y la longitud del espacio entre éste y el cubreobjetos es de 0,1 mm, hay que multiplicar por 10 el resultado anterior, para determinar el número de hematíe existentes.

Como la sangre se diluye, hay que multiplicar el resultado anterior por 200, ya que se ha partido de sangre entera contenida hasta el enrase de 0,5.

Fórmula: RBC= Hx5x10xD 

-RBC: recuento de hematíes (nº de hematíes por mm3 de sangre).

-H: Hematíes contados en 5 cuadrados medianos.

-D: Factor de dilución (200).

Resultados: 

👉Hacemos el recuento en zigzag:

1º Cuadrado= 41 hematíes

2º Cuadrado= 44 hematíes

3º Cuadrado= 37 hematíes 

4º Cuadrado= 49 hematíes

5º Cuadrado= 35 hematíes

RBC= 206 hematíes.

206 x 5 x 10 x 200= 2,060,000 /mm3. 

-Valores normales

•  RBC comprendido entre 4 y 5,5 millones/mm3 en mujeres.
•  RBC comprendido entre 4,5 y 6 millones/mm3 en hombres.

-Resultado: hemos obtenido un valor muy por debajo de lo normal, puede ser indicativo de anemia.

Gestión de residuos:

-Contenedor biológicos: pipeta Pasteur con restos de sangre, puntas de micropipeta.

-Contenedor químicos: restos del reactivo de Hayem.

👉Cuestiones:

1. ¿Qué se debe hacer si el líquido de Hayem contiene precipitados? antes de usarlo hay que filtrarlo.
2. ¿Cuál es el volumen de sangre diluida que hay sobre cada uno de los cuadrados pequeños donde se han contado los hematíes? 1mm3.