PRÁCTICA 9: Recuento de Leucocitos

Objetivo: Realizar un recuento de leucocitos a través de la utilización de la cámara de Neubauer.

Fundamento: El recuento de leucocitos (WBC)  consiste en la determinación del número de leucocitos presentes en un volumen determinado de sangre (1mm3).

Para el recuento en cámara de glóbulos blancos, se diluye la sangre problema en un líquido apropiado(reactivo de Turk) y posteriormente se deposita en la cámara de recuento, donde se cuentan las células presentes en cuatro cuadrantes de la misma.

Materiales: Papel de filtro, frasco lavador, cubreobjetos, micropipeta (100 y 1000 microlitros), puntas micropipeta, vaso de precipitado, tubos de ensayo, gradilla, pipeta Pasteur, tubo Eppendorf.

Reactivos: reactivo de Turk

Equipos: microscopio, pipeta de Thoma y auxiliar, cámara de Neubauer.

Muestra: sangre venosa.

Procedimiento: 

Pipeta de Thoma

1. Preparar la zona de trabajo y rotular todo.
2. Llenar un tubo de ensayo con reactivo de Turk.
3. Impregnar con agua el exterior de la cámara de Neubauer y pegar el cubreobjetos.
4. Para una dilución 1/10 se llena la pipeta de Thoma hasta 0,5 con sangre y el resto con reactivo de Turk hasta llegar a 11, si queremos una dilución de 1/20 se llena la pipeta de Thoma hasta 1 con sangre y el resto con el reactivo de Turk. Calibrar previamente con agua.
5. Quitar auxiliar de pipeteo y tapar orificios de la pipeta de Thoma con los dedos, homogeneizar.
6. Desechar las 3 primeras gotas y verter en cada pocillo de la cámara 1 gota.
7. Dejar reposar unos minutos y observar al microscopio con el objetivo de 40x para hacer el recuento de leucocitos.
8. Hacemos el recuento en zigzag, contando los leucocitos que hay en la zona de la derecha, en el centro y arriba, se excluyen los que hay en la zona de abajo y a la izquierda. 

Recuento

Se cuentan los leucocitos presentes en 4 cuadrados grandes, hay que dividir por 4 la cifra obtenida en el recuento, para calcular el nº de leucocitos que hay en un cuadrado grande.

Como la longitud de uno de los cuadrados grandes es de 1mm y la longitud del espacio comprendido entre estos y el cubre es de 0,1mm, hay que multiplicar por 10 el resultado anterior, para determinar el nº de leucocitos existentes, no en 0,1mm3, sino en 1mm3.

La sangre se diluye previamente antes del recuento, hay que multiplicar el resultado anterior por 10, si se ha partido de la sangre entera diluida a 1/10, o por 20, si se ha partido de la sangre entera diluida a 1/20. 

Fórmula WBC:  WBC= L/4 x10 xD

-L= Leucocitos contados en los cuatro cuadrantes grandes

-D= Factor de dilución (10 o 20)

Resultados: 

👉Hacemos el recuento en zigzag:

                                   

-1º Cuadrado: 61 leucocitos

-2º Cuadrado: 63 leucocitos

-3º Cuadrado: 66 leucocitos

-4º Cuadrado: 43 leucocitos

WBC= 233 Leucocitos

233/4 x10 x20= 11650/mm3

-Valores normales: 

• WBC comprendido entre 5000 y 11000/mm3. 
• Su disminución se produce en las leucopenias y su aumento se da en las leucocitosis.
• Obtenemos una leve leucocitosis.

Gestión de residuos:

-Contenedor biológicos: pipeta Pasteur con restos de sangre, puntas de micropipeta.

-Contenedor químicos: restos del reactivo de Turk.

👉Cuestiones:

-¿Cuál es el líquido de dilución utilizado en el WBC?  Es el líquido de Turk.

-¿Para qué sirve el violeta de genciana que contiene el líquido de dilución? Sirve para teñir el núcleo de los leucocitos, para poder observarlos mejor.

-¿Con qué objetivo se pueden encontrar los leucocitos? con el objetivo de 10X.

-Si la sangre se diluye 1/10 y se cuentan 100 leucocitos en 2 cuadrados grandes periféricos, ¿Cuál es el WBC obtenido?  WBC = 100/2 x 10 x 10 = 5.000 leucocitos / mm cúbico de sangre. Se considera un valor normal.