PRÁCTICA 2: Extensión sanguínea y panóptico rápido

Objetivo: aprender a realizar un frotis o extensión sanguínea para poder visualizar las células presentes en la muestra mediante el microscopio óptico.

Fundamento: una extensión sanguínea consiste en cubrir parcialmente un porta con una gota de sangre, de manera que las células formen una sola capa sobre el cristal.

Se puede realizar de forma manual o mediante un aparato (spinner), el cual centrifuga el porta con la sangre depositada en su centro. En esta práctica lo hemos realizado de forma manual.

♦Partes de la extensión:

• Cabeza: es la zona inicial de la extensión y la más gruesa ya que se encuentra más próxima a la gota de sangre empleada, en ella se encuentra la mayor proporción de linfocitos y hematíes apilados.
• Cuerpo: es la zona media del frotis, de espesor adecuado, en el se encuentra la zona ideal de observación, limita con la cola.
• Cola: es la zona final de la extensión, y la más fina, en ella se encuentra una mayor proporción de leucocitos grandes, los hematíes están deformados y son de tonalidad uniforme.
• Bordes: si los bordes están muy deshilachados, las células son difíciles de reconocer por estar deformadas o destruidas.

♦ Características de una buena extensión: 

• La cabeza debe estar cerca de un extremo del porta, dejando espacio para poner el nombre del paciente. En los portas que tienen una zona esmerilada, la extensión se comienza fuera de la zona opaca.
• La cola debe estar cerca al otro extremo del porta pero sin llegar a él.
• El borde de la cola tiene que estar finamente deshilachado (barbas).
• Toda la extensión tiene que ser fina y homogénea, facilitando la visualización de las células, ya que no aparecerían unas apiladas encima de otras.
• Los bordes laterales de la extensión deben estar separados del porta 1 mm.

♦ Defectos de una extensión sanguínea:

• Un tamaño inadecuado de la gota de sangre.
• Un error en la velocidad de realización.
• Un fallo en el ángulo de colocación de los portas.

👉Para visualizar las extensiones sanguíneas al microscopio las teñiremos con tinción de panóptico rápido, es un método de tinción diferencial, rápido (se realiza en 15 segundos), es una tinción de inmersión, donde el frotis se sumerge en la solución colorante durante el tiempo estipulado.

Materiales: papel de filtro, lancetas, gasas estériles, varios portaobjetos (esmerilados como extensor y normales), capilares rojos(con anticoagulante), cristalizador, puente de tinción,  portaobjetos, pipeta Pasteur, vasos de precipitado.

Reactivos: alcohol etílico, colorante de panóptico rápido (1-solución alcohólica de triarilmetano, 2-solución tamponada de xanteno y 3-solución de tiazina), agua destilada, aceite de inmersión.

Equipos: microscopio óptico.

Muestra: sangre fresca capilar. 

Procedimiento: 

Extensión sanguínea

♢Los portas deben estar limpios y sin grasa de los dedos, o sin cualquier marca, de lo contario, las extensiones podrían salir mal.

1. Con los dedos índice y pulgar de una mano, sujetamos un extremo del porta normal, cogiéndolo por los bordes y lo situamos sobre la mesa. 
2. Con un capilar cargado (sangre capilar), depositamos una gota en la cara superior del porta.
3. Colocamos un extremo del porta extensor (biselado) un poco por delante de la gota de sangre y formamos un ángulo de 45 grados con el porta soporte. 
4. Desplazamos suavemente hacia atrás el porta extensor, hasta que alcance la gota de sangre.
5. Dejamos que la gota se extienda por capilaridad, a todo lo largo del extremo del porta extensor.
6. Antes de que la sangre alcance los bordes de ese extremo, deslizamos el porta extensor hacia adelante, realizando un movimiento firme y uniforme, acabando a 1 cm del extremo final del porta soporte.
7. Secamos la extensión al aire, y rotulamos el porta.

TINCIÓN PANÓPTICO RÁPIDO

♢Colocamos los tres colorantes al lado del cristalizador en este orden:

 1-solución alcohólica de triarilmetano

 2-solución tamponada de xanteno.

 3-solución tamponada de tiazina.

1. Sumergimos los frotis en la solución  nº 1 durante 1 segundo, repitiendo la inmersión cuatro veces, en total (5 segundos), dejamos escurrir para eliminar el exceso del colorante.
2. Sumergimos los frotis en la solución nº 2, durante cinco veces, cada una 1 segundo de duración, dejamos escurrir.
3. Sumergimos los frotis en la solución nº 3, otras cinco veces, cada una 1 segundo de duración, lavamos con agua destilada y dejamos secar.
4. Observamos las extensiones con el microscopio óptico.

Resultados obtenidos: 

• Las primeras extensiones han salido regular, ya que echábamos una gota de sangre demasiado grande, y no tenemos la suficiente destreza para hacer el frotis.
• Han salido gruesas, algunas con estrías longitudinales y algún extremo final desflecado.
• Hemos podido visualizar hematíes, plaquetas y algún leucocito.

Gestión de residuos:

-Contenedor amarillo/cortopunzantes: lancetas.

-Contenedor biológicos: capilares y pipeta Pasteur con restos de sangre.

-Contenedor químicos: colorantes del cristalizador.

👉Cuestiones de esta práctica:

• ¿En qué se diferencia este método de las otras tinciones clásicas? es más rápido ya que se realiza en 15 segundos, y además éste método es de inmersión ya que se sumerge para teñirlo de forma vertical y no en horizontal como en Giemsa o Wright.
• ¿Cuántos segundos debe sumergirse el frotis en cada una de las soluciones? 5 segundos.
• ¿Cuál crees que es la solución fijadora? la solución alcohólica de triarilmetano.