PRÁCTICA 3: Tinción según Giemsa

Objetivo: Diferenciar los distintos componentes celulares de una extensión sanguínea.

Fundamento: Utilizamos como colorante la mezcla de azul de metileno (colorante básico) y eosina (colorante ácido)  propuesta por Giemsa. 

La tinción de Giemsa es un método diferencial usado para distinguir los distintos componentes celulares, atendiendo a la distinta afinidad hacia unos colorantes u otros.

Es una tinción de tipo Romanowsky que utiliza azul de metileno y productos de oxidación (azur a, azur b y azur c) como colorantes básicos, combinándolos con la eosina como colorante ácido.

Materiales: Portaobjetos limpios, puente de tinción, cristalizador, Pipetas Pasteur, frasco lavador, tubos de ensayo, gradilla metálica, parafilm, duquesita, vasos de precipitado, pipetas (10 ml y 1 ml), aspirador de cremallera.

Reactivos: Colorante en solución de Giemsa, solución tampón pH 7,2 (10X), metanol, aceite de inmersión. 

Muestra: sangre venosa anticoagulada, previamente homogeneizada.

Equipos: microscopio óptico.

Procedimiento: 

1. Preparamos la zona de trabajo, y rotulamos.
2. Realizamos la extensión sanguínea y dejamos secar.
3. Colocamos el frotis en el puente de tinción y lo cubrimos con metanol, dejamos actuar durante 3 minutos.
4. Escurrimos y dejamos secar al aire.
5. Hacemos una dilución en un tubo de ensayo de 0,2 ml de colorante según Giemsa y 2ml de solución tampón a pH 7,2. Cubrimos el frotis y dejamos actuar durante 25 minutos.
6. Escurrimos el frotis y lavamos con agua, después lavamos con solución tampón a pH 7,2 y dejamos secar al aire.
7. Observamos la extensión sanguínea en el microscopio con el objetivo 100x.

Observaciones: en una de las extensiones se desprendió un trozo de muestra, no sabemos si es debido a que la extensión no estaba bien hecha o debido al metanol.

Resultados: Hemos podido observar eritrocitos, plaquetas y varios neutrófilos.

Gestión de residuos:

-Contenedor amarillo/cortopunzantes: Pipeta Pasteur de cristal (si se rompe).

-Contenedor biológicos: pipeta Pasteur con restos de sangre.

-Contenedor químicos: colorantes del cristalizador y de las pipetas Pasteur.

👉Cuestiones de esta práctica:

1. ¿Cuáles son los anticoagulantes más adecuados para esta técnica? La heparina y EDTA.
2. ¿Con qué reactivo fijamos el frotis? Con el metanol.
3. ¿Cuánto tiempo debe actuar el colorante? Durante 25 minutos.