PRÁCTICA 12: Concentrado de leucocitos y recuento de Arneth (índice de lobularidad)

Objetivo: Obtención de un concentrado de leucocitos de una muestra de sangre y su posterior índice de lobularidad a través del recuento de Arneth.

Fundamento: En algunas circunstancias se indica la obtención de un concentrado de leucocitos como:

-En la obtención y el estudio microscópico  de células patológicas en una leucopenia.

-En la obtención de células en una leucopenia para la realización de pruebas citoquímicas.

-En la obtención de células para la búsqueda del corpúsculo de Barr, el cuál está producido por la condensación del material genético inactivado de un cromosoma X.

El recuento de Arneth consiste en el nº de lobulaciones que tiene una cantidad determinada de neutrófilos y determinar la media aritmética para conocer el nº de lóbulos promedio que tienen los neutrófilos de la muestra:

• Tipo 1: neutrófilos con el núcleo no segmentado, sin lobulaciones.
• Tipo 2: neutrófilos con el núcleo dividido una vez, con 2 lóbulos.
• Tipo 3: neutrófilos con el núcleo dividido dos veces, con 3 lóbulos.
• Tipo 4: neutrófilos con el núcleo dividido tres veces, con 4 lóbulos.
• Tipo 5: neutrófilos con el núcleo dividido cuatro veces, con 5 lóbulos.

Materiales: Papel de filtro, frasco lavador, portaobjetos, lancetas, vasos de precipitado, pipeta Pasteur y de cristal con chupetina, gradilla, tubo de ensayo, papel parafilm.

Reactivos: panóptico rápido, aceite de inmersión.

Equipos: microscopio y centrifugadora.

Muestra: sangre venosa y fresca.

Procedimiento: 

1. Preparamos los materiales y la zona de trabajo.
2. Para el concentrado de leucocitos traspasamos un poco de sangre a un tubo de ensayo limpio, lo tapamos con parafilm y lo llevamos a la centrifugadora a 15 minutos/1500rpm. 
3. Una vez centrifugado quitamos la capa del plasma con una pipeta Pasteur, y aspiramos la capa leuco plaquetaria con la pipeta de cristal para hacer el frotis.
4. Hacemos frotis sanguíneo con una gota de la capa leuco plaquetaria.
5. Hacemos la tinción con panóptico rápido.
6. Visualizamos frotis al microscopio, como solo se visualizaban monocitos y linfocitos, hemos hecho un frotis con sangre capilar.
7. Hacemos el recuento de 50 lóbulos:

• Neutrófilos con 1 lóbulos: 0
• Neutrófilos con 2 lóbulos: 13 x2= 26
• Neutrófilos con 3 lóbulos: 17 x3= 51
• Neutrófilos con 4 lóbulos: 18 x4= 72
• Neutrófilos con 5 lóbulos: 2   x5= 10
• Total lóbulos= 159

                                           

Resultados:

👉Índice de lobularidad: nº lóbulos contados/ nº neutrófilos observados

-IL: 159/50= 3,18

-El IL normal oscila entre 1,9 y 3.

• Si el valor obtenido es menor a 1,9 hay desviación hacia la izquierda (células inmaduras)= casos de infecciones y leucemia.
• Si el valor obtenido es mayor a 3, hay desviación hacia la derecha (células maduras y hasta 5 lóbulos)= casos de anemias megaloblásticas.
• Obtenemos un valor superior a 3, en este caso se trata de anemia megaloblástica.