PRÁCTICA 15: Determinación del Fibrinógeno
Objetivo: Determinación cuantitativa del tiempo del fibrinógeno.
Fundamento: El fibrinógeno en presencia de un exceso de trombina, se transforma en fibrina. El tiempo de formación del coágulo es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno presente en la muestra de plasma.
La determinación del fibrinógeno por el tiempo de coagulación de trombina está basada en el método descrito por Clauss: en presencia de altas concentraciones de trombina, el tiempo necesario para la formación del coágulo en el plasma diluido es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno.
Materiales: Papel filtro, micropipeta (10-100 microlitros) y puntas, mosca, tubos de coagulómetro, pipeta graduada y auxiliar.
Equipos: Coagulómetro y centrifugadora.
Reactivos: R1 (trombina bovina), R2 (tampón imidazol), R3 (solución Caolín).
Muestra: Plasma.
Procedimiento:
- Preparar los materiales y la zona de trabajo.
- Encender el coagulómetro y poner el programa FB, para atemperarlo a 37 ºC, y mezclar los reactivos sin agitarlos.
- En una cubeta añadimos 50 microlitros de muestra y 450 microlitros de R2 y mezclamos.
- De esa cubeta cogemos 0,2 ml y lo trasvasamos a otra cubeta al que añadimos 20 microlitros de R3.
- Ponemos el tubo a incubar durante 4-6 minutos a 37ºC.
- Transcurrido ese tiempo añadimos 0,1 ml de R1 y medimos el tiempo.
- Detener en el momento de formación del coágulo o en el coagulómetro cuando se haya detenido el tiempo. Obtenemos un tiempo de 0,50 segundos.
- Hemos obtenido un valor de 0,50 segundos, valor muy bajo, indicativo de alteraciones por fármacos.
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